1引言
安乃近,化學名為[(1,5-二甲基-2-苯基-3-氧代-2,3-二氫-1H-4吡唑-4基)甲氨基]甲烷磺酸鈉鹽一水合物,是一種應用廣泛的解熱鎮(zhèn)痛藥。安乃近的測定方法有滴定法､分光光度法､電化學分析法､熒光分析法､高效液相色譜法以及化學發(fā)光法。
在一定條件下安乃近的濃度與化學發(fā)光強度成正比。本文發(fā)現表面活性劑聚乙烯吡咯烷酮K30對安乃近與羅丹明6G的化學發(fā)光有較大的增強作用。該體系沒有采用任何氧化劑如KMnO4､H2O2､I2､Ce(IV)等,避免了氧化劑對光信號吸收和產生高背景而引起誤差。表面活性劑聚乙烯吡咯烷酮K30在此體系中的應用,也為其化學發(fā)光機理的探討提供了一定依據。
2.1儀器與試劑
IFIS-D型智能流動注射發(fā)光儀(西安瑞科電子設備有限公司)。圖1為流動注射化學發(fā)光法測定安乃近的流程示意圖。
通過一個六通閥完成進樣,樣品與試劑混合溶液流經反應池,反應產生的光信號被光電倍增管放大,由檢測器進行檢測(操作電壓為900V),最后將信號傳送到計算機中進行數據處理。
所用試劑除特別指明者外均為分析純,水為二次蒸餾水。安乃近對照品由中國藥品生物制品檢定所提供,安乃近針劑､片劑由藥店購買。
2.2標準品與樣品制備
標準品準確稱取50mg安乃近標準品,用二次蒸餾水定溶于50mL棕色容量瓶中,然后準確移取不同體積標準儲備液加以稀釋,得到不同濃度系列的標準安乃近溶液。
樣品對于片劑,取安乃近20片,準確稱重求,得每片的平均重量,然后對安乃近片劑進行研磨,分散均勻后準確稱取50mg置于50mL棕色容量瓶中,用二次蒸餾水定溶,最后經超聲波震蕩混和均勻。準確移取不同體積儲備液加以稀釋,所測樣品濃度應在工作曲線范圍內。對于針劑,直接稀釋2.00mL針劑安乃近,使樣品濃度在工作曲線范圍內即可。
無論是片劑樣品還是針劑樣品,均應在1小時內配制并完成測定。
3.1最佳條件選擇
3.1.1聚乙烯吡咯烷酮K30濃度
表面活性劑聚乙烯吡咯烷酮K30對光信號有一定的增強作用,我們對聚乙烯吡咯烷酮K30濃度與發(fā)光信號的關系進行了詳細的研究,發(fā)現光信號隨著聚乙烯吡咯烷酮K30濃度的不同而發(fā)生變化。
將聚乙烯吡咯烷酮K30的濃度從0開始逐漸增加,濃度為0.05%(W/V)時光信號最大,大于或小于此濃度光信號均有所減小,見圖2。為此,選擇聚乙烯吡咯烷酮K30的最佳濃度為0.05%(W/V)。
3.1.2羅丹明6G濃度
考察了不同熒光試劑對光信號的影響,結果見表1。從表中數據可以看出,羅丹明類熒光試劑均可使光信號有所增加,但羅丹明6G增加最多。
羅丹明6G濃度對光信號的影響見圖3。
開始時光信號隨著羅丹明6G濃度增大而增大,當濃度為0.075mmol/L時,光信號達到最大,之后光信號又隨著濃度的增大而減小。故實驗中選擇羅丹明6G的濃度為0.075mmol/L。
3.1.3硫酸濃度化學發(fā)光信號的大小與硫酸的濃度有很大的關系。硫酸濃度對光信號的影響見圖4。
當硫酸濃度為0.2mol/L時,光信號最大,此后,硫酸濃度再增加時,光信號不再發(fā)生變化。故選擇硫酸的濃度為0.2mol/L。
3.1.4試劑混合溶液流速
羅丹明6G與聚乙烯吡咯烷酮K30試劑混合溶液的流速對光信號的大小也有影響,開始階段流速增加光信號也增加,但當流速增加到3mL/min以上時,光信號幾乎不再發(fā)生變化,見圖5。所以本實驗選擇試劑混合溶液的流速為3mL/min。
3.1.5安乃近穩(wěn)定性
安乃近水溶液在空氣中放置不太穩(wěn)定,不穩(wěn)定程度取決于溫度､pH值､光線照射以及痕量金屬的存在等。將一定濃度安乃近水溶液放置不同時間,測其光信號,結果見圖6。放置時間在1小時內光信號基本穩(wěn)定。所以,安乃近水溶液應在棕色容量瓶中配制和儲存,并盡量一次配制,測定在1小時內完成。
3.2干擾研究
用0.8μg/mL的安乃近,對常用賦形劑和添加劑,如淀粉､硬脂酸鎂､糊精､葡萄糖､果糖､HCO3､HPO4等,進行干擾實驗。當它們的濃度為1mmol/L時幾乎不產生干擾,相對誤差均在5%以內,結果見表2。
有機試劑幾乎不能增強光信號,所以實驗中不采用有機溶劑。
3.3線性范圍及檢出限
在最佳實驗條件下,在0.2～10.0μg/mL范圍內安乃近濃度與化學發(fā)光強度成線性關系,回歸方程為I=55.4C+3.3,r=0.998,檢出限為0.08μg/mL。
4樣品測定
應用本法對安乃近針劑和片劑進行測定,并與紫外分光光度法相比較,兩種方法測定結果基本一致。另外,為了進一步證明本法測定的可靠性,向每一樣品中加入已知量的安乃近標準品進行了回收檢驗。測定結果見表4。
5機理探討
根據以前報道的相關發(fā)光機理推測,該體系的發(fā)光是由于空氣中的氧起到了氧化劑的作用,使安乃近氧化并產生微弱的化學發(fā)光。在聚乙烯吡咯烷酮K30存在下,羅丹明6G對光信號產生增敏作用,從而使光信號增強。
6結論
表面活性劑聚乙烯吡咯烷酮K30在安乃近化學發(fā)光測定中的應用具有重要意義。以前的報道只有吐溫系列可用于此體系,聚乙烯吡咯烷酮K30的應用開闊了研究的領域,有助于尋找能使測定靈敏度更高的表面活性劑,深入探討表面活性劑在此體系中的作用機理。
